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一、服務(wù)概述
        慢病毒(Lentivirus)是以HIV-1(人類(lèi)免疫缺陷I型病毒)為基礎發(fā)展起來(lái)的基因治療載體,可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到良好的基因治療效果。區別于一般的逆轉錄病毒,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,因此它可以有效地感染包括神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等在內的幾乎所有的哺乳動(dòng)物細胞,并且感染效率非常高,是傳統質(zhì)粒轉染方法的數倍甚至數十倍,能夠比較方便快捷地實(shí)現目的基因或目的shRNA的長(cháng)期、穩定表達,是目前較受歡迎的基因治療和基因修飾細胞治療研究工具,在體外實(shí)驗及體內實(shí)驗的研究中,慢病毒正在獲得越來(lái)越廣泛的應用。
        默賽爾生物采用第3代重組慢病毒包裝系統制備病毒顆粒,該套包裝系統具有較高的感染性和安全性能,病毒制備所必需的元件序列被拆分到4個(gè)質(zhì)粒當中,分別是:11個(gè)編碼目的基因的慢病毒表達質(zhì)粒;22個(gè)包裝質(zhì)粒(pLP1、pLP2)。其中一個(gè)質(zhì)粒編碼GagPol, 另外一個(gè)質(zhì)粒編碼Rev;31個(gè)編碼包膜蛋白的質(zhì)粒(pLP/VSVG)。將上述質(zhì)粒共同轉染到293T細胞中,即可生產(chǎn)出攜帶目的基因的重組慢病毒顆粒,也稱(chēng)為自我失活VSV-G假型慢病毒,在保證對目的細胞的高感染能力的同時(shí),也具有更好的安全性。

第三代慢病毒包裝輔助質(zhì)粒示意圖

第三代慢病毒結構示意圖


二、服務(wù)內容
1. 構建慢病毒載體,使用第三代慢病毒包裝轉染293T細胞。
2. 基因過(guò)表達慢病毒的制備;
3. 基因沉默shRNA慢病毒的制備。
4. 病毒純化,并進(jìn)行滴度確認。

三、服務(wù)優(yōu)勢
1. 采用第三代四質(zhì)粒包裝系統,具有更高的安全性;
2. 獲得的慢病毒滴度高,經(jīng)過(guò)濃縮后可提獲得滴度≥108TU/mL的慢病毒溶液;
3. 可選擇是否帶有熒光報告基因(GFP、Cherry等)和藥篩標記基因(Puro、Neo等);
4. 慢病毒的生產(chǎn)在cGMP實(shí)驗室中進(jìn)行,遵循嚴格的質(zhì)量控制標準,確保生產(chǎn)的慢病毒正確可靠。

四、服務(wù)示例(以攜帶PSK2基因的重組慢病毒制備為例)
1PSK2基因慢病毒表達質(zhì)粒構建

3 pLVX-CMV-GFP-PSK2質(zhì)粒酶切鑒定圖

2GFP-PSK2慢病毒的檢測

不同稀釋倍數的GFP-PSK2慢病毒感染293T細胞48小時(shí)后的顯微拍攝圖

不同稀釋倍數的GFP-PSK2慢病毒感染293T細胞48小時(shí)后細胞中PSK2基因表達的實(shí)時(shí)定量 PCR 曲線(xiàn)圖

4shRNA慢病毒基因沉默效果的檢測

兩種shRNA慢病毒感染5637細胞48小時(shí)后細胞中FRS2基因表達western結果
 

五、服務(wù)價(jià)格及周期

服務(wù)編號服務(wù)項目提供規格價(jià)格服務(wù)周期
RS001-1目的基因過(guò)表達慢病毒表達質(zhì)粒構建500ng/μL, 100μL
1-2
RS001-2目的基因沉默的shRNA慢病毒質(zhì)粒構建500ng/μL, 100μL
1-2
RS001-3目的基因過(guò)表達慢病毒制備108TU/mL, 1mL
3-4
RS001-4目的基因沉默的shRNA慢病毒制備108TU/mL, 1mL
3-4

 

六、技術(shù)服務(wù)流程
1. 用戶(hù)下載并填寫(xiě)慢病毒包裝技術(shù)服務(wù)協(xié)議書(shū),發(fā)送至service@morecell.com.cn。
2. 雙方確認并簽訂技術(shù)服務(wù)協(xié)議書(shū),按照協(xié)議內容進(jìn)行技術(shù)服務(wù)。

七、客戶(hù)須知
1. 如客戶(hù)所需包裝的目的基因由客戶(hù)提供,客戶(hù)提供需過(guò)表達或沉默的基因/蛋白相關(guān)信息(包括基因名稱(chēng)、NCBI編號、CDS區序列、目的基因所在載體圖譜、酶切位點(diǎn)、測序結果等等);
2. 客戶(hù)應對所提供的材料及信息負責,如因客戶(hù)提供的材料及信息不準確而引起的實(shí)驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶(hù)承擔。

八、交付結果
1. 含目的基因序列或基因沉默shRNA序列的慢病毒表達質(zhì)粒(≥500ng/μL,100μL
2. 含目的基因序列或基因沉默shRNA序列的慢病毒溶液(≥108TU/mL,1mL);
3. 陰性對照慢病毒溶液(≥108TU/mL,1mL
4. 完整的實(shí)驗報告。